Optimization of PCR conditions by recombinant DNA polymerase I originating from Thermus scotoductus K1 strain

Abstract

The optimization of PCR reaction components and cycling conditions for novel recombinant TsK1 polymerase originating from Thermus scotoductus K1 strain has been performed. It was shown that Mg2+ in final concentration of 3 mM was suitable for efficient PCR using TsK1, and higher concentrations inhibited the reaction. Addition of glycerol as enhancer was essential for PCR. Enzyme exhibited amplification activity in both mono- and multiplex PCR, and might become a promising tool for different molecular biological applications as well as in diagnostics. Իրականացվել է ռեկոմբինանտ TsK1 պոլիմերազի կիրառմամբ ՊՇՌ ամպլիֆիկացման պայմանների բարելավում։ Ցույց է տրվել, որ արդյունավետ ամպլիֆիկացիայի իրականացման համար բավարար է Mg2+ իոնների 3 մՄ կոնցենտրացիան, ընդ որում, ավելի բարձր կոնցենտրացիաները ճնշում են ՊՇՌ-ն։ Ռեակցիայի իրականացման համար պարտադիր է գլիցերոլի ավելացումը որպես կայունացուցիչ։ Ֆերմենտը ցուցաբերում է արդյունավետ ամպլիֆիկացիայի հնարավորություն ինչպես միակի, այնպես էլ՝ մուլտիպլեքս ՊՇՌ ռեակցիաներում և կարող է խոստումնալից գործիք հանդիանալ տարաբնույթ մոլեկուլային գենետիկական կիրառություններում ինչպես հետազոտական, այնպես էլ՝ ախտորոշման ոլորտներում։ Была проведена оптимизация компонентов ПЦР реакции и условий амплификации с применением новой рекомбинантной полимеразы TsK1, происходящей от штамма Thermus scotoductus K1. Эффективный ПЦР осушествляется при наличии Mg2+ в конечной концентрации 3 мМ, а высокие концентрации подавляют реакцию. Также добавление глицерола в качестве усилителя крайне необходимо для ПЦР. Фермент проявляет высокую эффективность амплификации как в моно-, так и в мультиплексной ПЦР и может стать многообещающим инструментом для различных молекулярно-биологических применений в рутинных исследованиях, а также в диагностике.